實(shí)驗(yàn)介紹
懸尾實(shí)驗(yàn)（Tail suspension test, TST）是一種經(jīng)典而又能快速評(píng)價(jià)抗抑郁**、興奮**、****藥效的方法。該動(dòng)物模型將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的尾部進(jìn)行固定，使其頭部向下懸掛，動(dòng)物在該環(huán)境中掙扎，企圖擺脫該困境，在經(jīng)過(guò)努力仍無(wú)法擺脫后，出現(xiàn)間斷性不動(dòng)，顯示“行為絕望”狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在該環(huán)境中拼命掙扎試圖逃跑又無(wú)法逃脫，從而提供了一個(gè)無(wú)可回避的壓迫環(huán)境，一段時(shí)間的實(shí)驗(yàn)后，記錄處于該環(huán)境的動(dòng)物產(chǎn)生絕望的不動(dòng)狀態(tài)過(guò)程中的一系列參數(shù)，動(dòng)物的表現(xiàn)出的這種典型的“不動(dòng)狀態(tài)”，反映了一種被稱之為“行為絕望狀態(tài)”，這種行為絕望模型與抑郁癥類似，而且對(duì)絕大多數(shù)抗抑郁**敏感，而且其藥效與臨床藥效顯著相關(guān)，所以被廣泛用于抗抑郁**的初選。
實(shí)驗(yàn)工具
懸尾裝置，醫(yī)用膠帶，VisuTrack攝像跟蹤系統(tǒng)以及分析軟件（上海欣軟）。推薦使用塑料懸尾實(shí)驗(yàn)箱，尺寸通常為55cm高* 60cm*寬* 11.5cm深。為了防止動(dòng)物之間的觀察或相互作用，實(shí)驗(yàn)箱中間有一個(gè)擋板實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隔開。同時(shí)保證每只動(dòng)物的隔間足夠?qū)挸?，讓?dòng)物碰不到懸尾箱的箱壁。每個(gè)隔間的尺寸建議不低于:55cm高* 15cm*寬* 11.5cm深這個(gè)尺寸。小鼠的鼻子和實(shí)驗(yàn)室箱子的地板之間的大致距離建議為20-25厘米。分析軟件推薦使用VisuTrack動(dòng)物行為分析軟件，軟件可任意截取視頻，準(zhǔn)確性高。懸尾實(shí)驗(yàn)與曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)等測(cè)試不同，不應(yīng)該跟蹤動(dòng)物的質(zhì)心/重心。VisuTrack動(dòng)物行為分析軟件(上海欣軟)通過(guò)調(diào)查小鼠四肢的真實(shí)動(dòng)作，實(shí)時(shí)分析小鼠搖擺(絕望狀態(tài))、掙扎行為等指標(biāo)，自動(dòng)存儲(chǔ)原始實(shí)驗(yàn)視頻并可進(jìn)行分析，減少了人為誤差。
測(cè)試方法與指標(biāo)
測(cè)試方法：
1) 將已在動(dòng)物房適應(yīng)了三天的動(dòng)物從SPF動(dòng)物房中拉入實(shí)驗(yàn)室。SPF級(jí)動(dòng)物房應(yīng)設(shè)置的參數(shù)為室溫（22±2℃），濕度（40±20℃）%，12 h 晝夜交替燈光使動(dòng)物有正常晝夜節(jié)律，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在此環(huán)境可自由攝取食物和水。
2) 將動(dòng)物輕柔地從籠中拿出來(lái)，以*快的速度將其尾巴固定好，不得給小鼠造成多余的壓力和應(yīng)激狀態(tài)。具體操作為用醫(yī)用膠帶粘在距離尾巴** 1 cm，以便將動(dòng)物的尾巴從裝置懸掛桿上懸吊下來(lái)。動(dòng)物尾巴**與地面之間的高度約為 30 cm，使小鼠呈頭倒式位。
3) 攝像鏡頭需提前調(diào)好，將其調(diào)到水平對(duì)準(zhǔn)小鼠身體的位置，以便錄像可呈現(xiàn)完全的視野。
4) 實(shí)驗(yàn)總共需錄視頻 6 min，錄像記錄動(dòng)物實(shí)驗(yàn)期間的行為，但記錄后4min動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間。
5) 記錄時(shí)長(zhǎng)完成后，撕去醫(yī)用膠布將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小心取下來(lái)，并放回原籠中做好記錄。
6) 所有動(dòng)物測(cè)試完成后，及時(shí)清理儀器中的糞便和尿液。
懸尾與強(qiáng)迫通用實(shí)驗(yàn)箱，XR-XQ202，上海欣軟
主要的指標(biāo)及行為學(xué)意義：
1) 肢體不動(dòng)：當(dāng)動(dòng)物停止掙扎時(shí),身體保持垂直倒懸狀態(tài),靜止不動(dòng)，這個(gè)指標(biāo)可視為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)習(xí)得性無(wú)助后放棄掙扎的行為表現(xiàn)。動(dòng)物在懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間越長(zhǎng)，表明動(dòng)物的抑郁程度越重。
2) 掙扎行為：當(dāng)動(dòng)物出現(xiàn)企圖掙扎、起身時(shí)的行為，動(dòng)物的掙扎時(shí)間越短，表明動(dòng)物的抑郁程度就更重。
數(shù)據(jù)如何統(tǒng)計(jì)：
記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的掙扎行為和不動(dòng)時(shí)間，一般換算為以秒為單位的計(jì)量。通過(guò)與對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比，一般使用T檢驗(yàn)即可，至于是否選擇配對(duì)或未配對(duì)則需要跟自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩?lái)選擇，此處不展開說(shuō)明。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
（測(cè)試時(shí)長(zhǎng)、是否可重復(fù)、大小鼠的差異、品系）
1.膠帶要纏在接近動(dòng)物尾巴**的地方，不要纏在靠近尾巴根部的地方，這樣會(huì)影響動(dòng)物的活動(dòng)。若太靠下動(dòng)物的掙扎與活動(dòng)會(huì)受到限制，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2.背景板要與動(dòng)物的顏色形成強(qiáng)烈反差，以便軟件識(shí)別，推薦使用白光背光板。例如用白色小鼠時(shí)，需要選用黑色的背景板，以便視頻錄制清晰，易分辨；反之亦然，用黑色的c57小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，則需要考慮用白色的背景板來(lái)完成襯托和凸顯。
3.不同品種的小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)不同：例如空白對(duì)照組c57小鼠不動(dòng)時(shí)間較長(zhǎng),均值多大于100s; 空白對(duì)照組的ICR 小鼠不動(dòng)時(shí)間均值多小于100 s; 抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn):不動(dòng)時(shí)間與對(duì)照組相比有顯著性增加(P < 0. 05)即可，并不需要單純比較不動(dòng)時(shí)長(zhǎng)。
4.懸尾實(shí)驗(yàn)并不建議用較重的大鼠，因?yàn)榇笫笾荒芡ㄟ^(guò)它們的尾巴來(lái)支持它們的體重，這對(duì)大鼠來(lái)說(shuō)是痛苦的。同樣的道理，應(yīng)該注意避免使用異常重的小鼠（例如用于模擬肥胖的小鼠），在這種情況下，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)該尋找替代性的測(cè)試，例如強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。
5.動(dòng)物從飼養(yǎng)環(huán)境帶入實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)適應(yīng)一段時(shí)間，通常至少一個(gè)小時(shí)以上。
6.實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)保持安靜，突然大或者一直持續(xù)的噪音會(huì)使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物驚慌失措。
7.小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間通常為6分鐘。與強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不同，小鼠在實(shí)驗(yàn)初期更容易表現(xiàn)出不動(dòng)。
8. 底部建議放置一個(gè)可拆卸的拖盤，收集糞便或尿液。
9. 懸掛后動(dòng)物鼻尖與設(shè)備地板之前的參考距離在 20~25 cm 左右。
10.短時(shí)間不建議將此實(shí)驗(yàn)重復(fù)**遍，以免對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心理狀態(tài)產(chǎn)生影響。
11.測(cè)試中，前肢只有小鼠運(yùn)動(dòng)，后肢不動(dòng)，可視為動(dòng)物的絕望狀態(tài)。
12.由于運(yùn)動(dòng)的慣性，小鼠的鐘擺式活動(dòng)也需要視為動(dòng)物的絕望狀態(tài)。
13.懸尾與強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)相比，該實(shí)驗(yàn)沒有因浸泡在水中而導(dǎo)致體溫降低的風(fēng)險(xiǎn)。這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)在靈敏度和性能上有各種重要的差異，一個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可能無(wú)法在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中重復(fù)，故應(yīng)理性看待實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
14.懸掛用的膠帶應(yīng)牢固地粘貼在小鼠尾部和懸掛桿上，并且足夠堅(jiān)固以承受正在測(cè)試的小鼠的重量。但是，膠帶不應(yīng)該過(guò)于粘滯應(yīng)保證既可以順利固定動(dòng)物，又不至于在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后難以從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尾部移除，膠帶尺寸可盡量統(tǒng)一。
15.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后（通常是 6 分鐘），將動(dòng)物放回鼠籠，應(yīng)輕輕將膠帶從尾巴上拉下來(lái)，不要從尾巴上撕扯膠帶，避免給動(dòng)物帶來(lái)痛苦。
16.清潔用品，每次實(shí)驗(yàn)完成，收集糞便和尿液，徹底擦拭懸掛盒等儀器設(shè)備。
17.在實(shí)驗(yàn)前幾天和后幾天推薦測(cè)試動(dòng)物的行動(dòng)能力，如自發(fā)活動(dòng)等。目的是為了排除動(dòng)物自身運(yùn)動(dòng)能力的影響，而更加說(shuō)明是動(dòng)物的抑郁程度不同而產(chǎn)生不動(dòng)或掙扎樣行為。
18.本實(shí)驗(yàn)在短期內(nèi)不建議重復(fù)，若必須重復(fù)一般建議兩次實(shí)驗(yàn)間隔半個(gè)月以上。
19.若是多只動(dòng)物同一時(shí)間段做實(shí)驗(yàn)，則需要注意每只動(dòng)物的間隔，以及動(dòng)物與動(dòng)物之間需要用不透明的擋板隔開，防止出現(xiàn)干擾。
實(shí)驗(yàn)心得和經(jīng)驗(yàn)
懸尾實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單，時(shí)間短，在一段時(shí)間內(nèi)出數(shù)據(jù)的效率很高。比起強(qiáng)迫游泳，關(guān)于溫度沒有什么太需要注意的地方，但一定要注重動(dòng)物福利的落實(shí)和準(zhǔn)確識(shí)別不動(dòng)狀態(tài)，做到識(shí)準(zhǔn)、記準(zhǔn)。
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