摘要 目的: 觀察電針三陰交穴對(duì)自然更年期大鼠焦慮行為學(xué)的影響。方法: 將大鼠分為正常組、模型組和**組，**組在三陰交穴處進(jìn)行電針，隔日 1 次，共** 15 次。正常組、模型組常規(guī)飼養(yǎng)，隔日抓取刺激。記錄在高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中焦慮行為數(shù)據(jù)( 進(jìn)入開(kāi)放臂次數(shù)、向下探究次數(shù)、封閉臂后腿直立次數(shù)和進(jìn)入開(kāi)放臂時(shí)間等) 。結(jié)果: 與正常對(duì)照組比較，模型組的OE% 、OT% 均顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) ，HD 值均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0. 01) 表現(xiàn)出明顯的焦慮癥狀，模型組、**組的 OE + CE 差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞0. 05) ; 與模型組比較，**組的 OE%及 OT%均顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜0. 05) ，**組的 HD 值明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜0. 05) ; ＲE 值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論: 電針三陰交有一定的抗焦慮作用。

關(guān)鍵詞 電針; 高架十字迷宮; 自然更年期大鼠; 三陰交

圍絕經(jīng)期綜合征( Peri-menopausal Syndrome，PMS)是婦科的常見(jiàn)病，指婦女絕經(jīng)前后因卵巢功能衰退，出現(xiàn)性**波動(dòng)或減少所致的以植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主，伴有神經(jīng)心理癥狀的一組癥候群，調(diào)查顯示，2030 年我國(guó) 50 歲以上婦女將達(dá) 2. 8 億，當(dāng)今社會(huì)的激烈競(jìng)爭(zhēng)，生活作息的不規(guī)律等都影響著圍絕經(jīng)期婦女的身心健康。在圍絕經(jīng)期這一過(guò)程中，由于卵巢功能逐漸退化，大部分 PMS 患者因不能適應(yīng)圍絕經(jīng)期的生理變化而表現(xiàn)出特有的身心癥狀，如因植物神經(jīng)功能紊亂而出現(xiàn)的陣發(fā)性潮熱、眩暈、出汗、**耳鳴，焦慮不安等。圍絕經(jīng)期焦慮癥臨床表現(xiàn)為焦慮不安、心煩、**、敏感多疑等癥狀，常困擾更年期婦女。研究發(fā)現(xiàn)，大約 75%左右的更年期婦女出現(xiàn)神經(jīng)精神癥狀，10% ～ 15% 婦女因癥狀較嚴(yán)重需要接受**。本實(shí)驗(yàn)以自然衰老更年期大鼠為模型，通過(guò)電針三陰交**后，對(duì)大鼠進(jìn)行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)，采用動(dòng)物行為活動(dòng)分析系統(tǒng)來(lái)分析判定行為學(xué)指標(biāo)，以初步評(píng)價(jià)電針三陰交穴對(duì)更年期大鼠焦慮行為學(xué)的改善作用。

1 材料與方法

1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型制備 根據(jù)文獻(xiàn)方法，11 ～15 月齡雌性 SD 大鼠機(jī)體病理生理與婦女更年期類(lèi)似，表明已進(jìn)入更年期。故我們選取 11 ～15 月齡雌性SD 大鼠作為本實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物模型。**組織涂片法是有效區(qū)分大鼠動(dòng)情周期各個(gè)階段的一種簡(jiǎn)便方法，通過(guò)**涂片法即每日定時(shí)將大鼠的**涂片用堿性美藍(lán)溶液染色后在顯微鏡下觀察其組織學(xué)變化，連續(xù)觀察 3 個(gè)動(dòng)情周期( 15 d) ，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、種類(lèi)及數(shù)量篩選符合圍絕經(jīng)期變化規(guī)律的大鼠 16 只，體重( 320 ±20) g。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字法分為: 更年期對(duì)照組( 模型組)8 只和電針**組( **組) 8 只。另將 3 個(gè)月齡大鼠8 只作為青年對(duì)照組( 正常組) ，體重( 220 ± 20) g，共 3組。所有 SD 大鼠均為清潔級(jí)，由北京維通利華動(dòng)物中心提供( 許可證編號(hào)為 SCXK( 京) 2012 －0001) 。動(dòng)物置于清潔柜中，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度保持在( 20 ± 2) ℃，濕度為 65%，12 h 光暗周期，自由攝食和飲水。

1. 2 儀器 高架十字迷宮、高架十字迷宮視頻分析系統(tǒng)、韓氏穴位神經(jīng)刺激儀( 上海欣軟信息科技有限公司) 高架十字迷宮結(jié)構(gòu): 由 2 條相對(duì)的開(kāi)放臂( Open Arm，長(zhǎng) × 寬分別為 45 cm ×15 cm) 、兩條相對(duì)的封閉臂( Enclosed Arm，長(zhǎng) × 寬 × 高分別為45 cm ×15 cm ×30 cm) 及一個(gè)聯(lián)接4 條臂的中央平臺(tái)( CentralPlatform，15 cm × 15 cm) 組成，即開(kāi)放臂 － 中央平臺(tái) － 開(kāi)放臂或封閉臂 － 中央平臺(tái) － 封閉臂，此二者互相垂直成為“╈”( plus) 形狀。封閉臂頂部開(kāi)放。迷宮四條臂合中央平臺(tái)均為深灰色，整體固定于鐵制支架上，使其距地面高度為50 cm。在中央平臺(tái)上方安置攝像頭。毫針: 華佗牌不銹鋼針灸針( 規(guī)格: 長(zhǎng) 13 mm，直徑 0. 22 mm; 蘇州華佗醫(yī)療器械有限公司制造) 。

1. 3 針刺** 穴位定位和刺法參考林文注主編《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》選取雙側(cè)三陰交穴，直刺 3 mm，進(jìn)行電針刺激，采用疏密波，頻率 2/100 Hz，強(qiáng)度以針柄輕微抖動(dòng)為宜，每次留針 20 min。隔日 1 次，共計(jì) 15 次。其他各組常規(guī)飼養(yǎng)，隔日抓取。

1. 4 行為學(xué)觀測(cè)方法 操作間內(nèi)保持較暗的光線(xiàn)( 以1. 5 m 距離處能區(qū)分大鼠細(xì)微活動(dòng)的*低亮度為準(zhǔn)) 、室溫 24 ℃、安靜條件下進(jìn)行。迷宮測(cè)試開(kāi)始前將待測(cè)大鼠放入1 個(gè)鼠籠內(nèi)，任其自由探究5 min 后迅速放于迷宮的中央平臺(tái)處，使其頭部正對(duì)其中任一開(kāi)放臂，釋放后即開(kāi)始觀察測(cè)試并同步錄像。每只大鼠測(cè)試 5min。取出大鼠后，用干抹布蘸 75% 乙醇及時(shí)**每只動(dòng)物的排泄物，待乙醇揮發(fā)擴(kuò)散后，再進(jìn)行下一只大鼠的測(cè)試。高架十字迷宮對(duì)大鼠焦慮行為學(xué)的影響

1. 5 行為學(xué)觀察指標(biāo) 1 ) 進(jìn)入開(kāi)放臂次數(shù) ( OpenArm Entry，OE) : 進(jìn)入到任一開(kāi)放臂的次數(shù)，以大鼠 4個(gè)爪子均進(jìn)入到臂內(nèi)為準(zhǔn)，中途一個(gè)爪子從該臂中完全退出則為該次進(jìn)入活動(dòng)完成; 2) 進(jìn)入開(kāi)放臂時(shí)間( Open Arm Time，OT) ，單位: s; 3) 進(jìn)入封閉臂次數(shù)( Close Arm Entry，CE) : 進(jìn)入到任一封閉臂的次數(shù)，以大鼠 4 個(gè)爪子均進(jìn)入到臂內(nèi)為準(zhǔn); 4) 進(jìn)入封閉臂時(shí)間( Close Arm Time，CT) ，單位: s; 5) OE 百分率 = OE/( OE + CE) ×100%; 6) OT 百分率 = OT/( OT + CT) ×100% ; 7) 進(jìn)入開(kāi)放臂和封閉臂的總次數(shù)( OE + CE) :表示大鼠的運(yùn)動(dòng)活力; 8) 向下探究次數(shù)( Head Dip-ping，HD) : 大鼠置身于中央平臺(tái)或開(kāi)放臂時(shí)，一邊用前爪抓住迷宮邊緣，一邊把頭部和肩部伸出開(kāi)放臂的邊緣向迷宮外面探究的行為次數(shù); 9) 封閉臂內(nèi)后腿直立次數(shù)( Ｒearing，ＲE) : 大鼠在封閉臂內(nèi)前腿抬起以后腿支持使身體豎立的次數(shù)。

1. 6 分析及數(shù)據(jù)處理方法 運(yùn)用國(guó)際公認(rèn)的荷蘭Noldus 公司開(kāi)發(fā)的動(dòng)物行為活動(dòng)標(biāo)記分析系統(tǒng) TheObserver 5. 0 和 Etho Vision 3. 0 兩套軟件對(duì)各組大鼠有關(guān)自主活動(dòng)、學(xué)習(xí)與記憶、焦慮等行為進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。采用 SPSS 17. 0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，先進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，計(jì)量資料進(jìn)行單因素方差分析，方差不齊者用秩和檢驗(yàn)。高架十字迷宮對(duì)大鼠焦慮行為學(xué)的影響

2 結(jié)果

2. 1 電針三陰交對(duì)大鼠 OE% 、OT% 、OE + CE 的影響與正常對(duì)照組比較，模型組的 OE%、OT% 均顯著減少( P ＜0. 05，P ＜0. 01) 表現(xiàn)出明顯的焦慮癥狀。與模型組比較，**組的 OE% 及 OT% 均顯著增高( P ＜0. 05) 。

2. 2 電針三陰交對(duì)大鼠 HD 和 ＲE 的影響 與正常組比較，模型組的 HD 值均顯著升高( P ＜ 0. 01) ，表現(xiàn)明顯的焦慮癥狀。與模型組比較，**組的 HD 值顯著降低( P ＜0. 05) 。( 見(jiàn)表 2)

3 討論

圍絕經(jīng)期綜合征中醫(yī)稱(chēng)為“絕經(jīng)前后諸癥”范疇，歷代文獻(xiàn)關(guān)于本病的論述散見(jiàn)于“臟躁”“心悸”“**”“眩暈”“**”“郁證”等病癥中。其病機(jī)主要為腎氣虛，天癸竭，沖任脈虛，臟腑氣血功能失調(diào)。隨著我國(guó)人口結(jié)構(gòu)不斷老齡化和社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)日益激烈，**的工作環(huán)境、家庭關(guān)系緊張及精神等因素影響，婦女進(jìn)入更年期逐漸增加、年齡提早，從而使圍絕經(jīng)期焦慮癥的發(fā)病率亦明顯增加。因此**和緩解更年期綜合征焦慮癥具有重要的社會(huì)意義。

三陰交在*****、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)、增強(qiáng)**功能、調(diào)節(jié)血流變以及對(duì)**肌電收縮影響和大腦**參與方面已取得一定認(rèn)識(shí)。三陰交作為足太陰脾經(jīng)經(jīng)穴，又是足太陰、足厥陰、足少陰三條經(jīng)脈的交會(huì)穴，本穴在千金方中言其別名為承命、太陰，具有補(bǔ)脾胃，助運(yùn)化，化濁利濕，通經(jīng)活絡(luò)，調(diào)和氣血，滋補(bǔ)肝腎之功效，婦女的生理特點(diǎn)與肝脾腎三臟關(guān)系密切，因此三陰交穴在**婦科病癥方面有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，常作為婦科**的優(yōu)選穴位。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)電針三陰交穴，來(lái)改善圍絕經(jīng)期所出現(xiàn)的身心癥狀。高架十字迷宮對(duì)大鼠焦慮行為學(xué)的影響

90% 的圍絕經(jīng)女性擁有完整的卵巢，且其**水平呈現(xiàn)逐漸衰退過(guò)程，去勢(shì)模型大鼠除影響雌**外還使促性腺**釋放**、黃體生成素及促卵泡素等水平快速下降。不僅如此，卵巢的摘除還會(huì)影響雄**的水平。采用 X 線(xiàn)照射破壞卵巢所致癥狀來(lái)反映圍絕經(jīng)期綜合征主要表現(xiàn)，但經(jīng) X 線(xiàn)照射后可明顯出現(xiàn)放射線(xiàn)腸炎癥狀，嚴(yán)重可伴有大鼠死亡?？傊捎萌?shì)模型和 X 線(xiàn)照射破壞卵巢模型雖然能達(dá)到**水平的變化，但不能準(zhǔn)確地模擬自然衰老過(guò)程出現(xiàn)的病理生理變化。本實(shí)驗(yàn)以自然衰老更年期大鼠為模型，因圍絕經(jīng)期出現(xiàn)的機(jī)體變化不是單純卵巢的生理改變和相關(guān)**水平的變化，而是機(jī)體整體的改變，由于大鼠在自然衰老過(guò)程中未受到人為地干預(yù)，其機(jī)體生理病理的變化與人類(lèi)圍絕經(jīng)期的變化極為相似，可較客觀地反映人體的變化過(guò)程。這也符合中醫(yī)順應(yīng)自然的理論。

實(shí)驗(yàn)中所采用的高架十字迷宮是國(guó)際公認(rèn)的動(dòng)物焦慮行為測(cè)評(píng)的優(yōu)選裝置。利用動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境的探究特性和對(duì)高懸敞開(kāi)臂的恐懼形成動(dòng)物的矛盾沖突來(lái)考察動(dòng)物的焦慮狀態(tài)。并且其作為焦慮大鼠模型的評(píng)價(jià)方法具有很好的復(fù)測(cè)信度。觀察實(shí)驗(yàn)指標(biāo)以大鼠 OE%與 OT%反映大鼠焦慮狀態(tài); 以( OE + CE)反映大鼠的運(yùn)動(dòng)能力; 以開(kāi)放臂和中央臺(tái)區(qū) HD 次數(shù)反映在非保護(hù)區(qū)的探索行為，與焦慮程度具有相關(guān)性; 封閉臂 ＲE 值也可用來(lái)觀察電針三陰交有無(wú)**作用及**強(qiáng)度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，模型組的 OE%、高架十字迷宮對(duì)大鼠焦慮行為學(xué)的影響

OT% 分別為( 14. 44 ± 3. 85) 、( 3. 10 ± 0. 64) 表明自然衰老更年期大鼠較少進(jìn)入或者停留于開(kāi)放臂，而趨向探究封閉臂，而電針**組的 OE%、OT% 值分別為

( 26. 85 ±5. 99) 、( 12. 70 ± 4. 01) 較模型對(duì)照組顯著增加( P ＜0. 05) ，說(shuō)明該組大鼠對(duì)開(kāi)放臂和非保護(hù)區(qū)的探究增加，提示電針三陰交具有抗焦慮作用。與模型組比較，**組的 HD 值顯著降低，HD 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜0. 01) ，因此，我們可以認(rèn)為電針三陰交具有一定的抗焦慮作用。高架十字迷宮對(duì)大鼠焦慮行為學(xué)的影響