【摘要】 目的 通過(guò)觀察蒙醫(yī)溫針對(duì)**模型大鼠自主活動(dòng)的影響及對(duì)****鈉致睡眠時(shí)間的影響,探討蒙醫(yī)溫針的改善睡眠作用。方法 ①選用****鈉誘導(dǎo)睡眠的法,取健康雄性 SD 大鼠 30 只,分為空白對(duì)照組和蒙醫(yī)溫針組,每組 15只,以****鈉致眠時(shí)間為觀察指標(biāo)。②采用對(duì)氯苯丙氨酸致**大鼠模型,取健康雄性 SD 大鼠 60 只,分為空白對(duì)照組、**模型組、蒙醫(yī)溫針組和***注射液組,每組 15 只,觀察大鼠的自主活動(dòng)和一般情況。結(jié)果 蒙醫(yī)溫針組****鈉致眠大鼠睡眠潛伏期與空白對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。蒙醫(yī)溫針組****鈉致眠大鼠睡眠時(shí)間與空白對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。**模型組、蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠造模前體重較空白對(duì)照組減輕(均 P＜0.01)。**模型組大鼠**后體重與空白對(duì)照組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠體重增加,與空白對(duì)照組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。**模型組大鼠活動(dòng)時(shí)間明顯高于空白對(duì)照組(P＜0.01)。蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠活動(dòng)時(shí)間明顯低于**模型組(均 P＜0.05)。**模型組大鼠站立次數(shù)明顯高于空白對(duì)照組(P＜0.05),蒙醫(yī)溫針組和***組大鼠站立次數(shù)明顯低于**模型組(P＜0.05,P＜0.01)。結(jié)論 蒙醫(yī)溫針對(duì)大鼠有**作用和改善睡眠功能作用。
【關(guān)鍵詞】 針灸療法;蒙醫(yī);睡眠;自主活動(dòng);大鼠;**模型
**是睡眠的發(fā)生或維持障礙,影響日常生活的一類病癥,屬蒙醫(yī)“赫依”病范疇。西醫(yī)**本病仍存在難以根治、不同程度地產(chǎn)生**反應(yīng)、耐藥性和依賴性等問(wèn)題。通過(guò)文獻(xiàn)記載和近年來(lái)的臨床觀察發(fā)現(xiàn),蒙醫(yī)溫針對(duì)**癥的療效顯著,同時(shí)具有無(wú)毒副反應(yīng)、**可靠等特點(diǎn),其*大優(yōu)勢(shì)在于可以避免口服**所致的副反應(yīng)。因此,尋找適當(dāng)有效的針刺干預(yù)措施是臨床與實(shí)驗(yàn)研究的重要課題之一。本實(shí)驗(yàn)采用****鈉誘導(dǎo)大鼠睡眠的方法,觀察蒙醫(yī)溫針對(duì) SD 大鼠睡眠的影響,并選用對(duì)氯苯丙氨酸致**大鼠模型,采用曠場(chǎng)試驗(yàn)(OFT 試驗(yàn)),觀察**大鼠的自主活動(dòng)和一般情況,探討蒙醫(yī)溫針改善睡眠的作用,現(xiàn)報(bào)告如下。蒙醫(yī)溫針對(duì)大鼠睡眠時(shí)間和自主活動(dòng)的影響
 
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
健康雄性SPF級(jí)SD大鼠80只,體重(180±220)g,由中國(guó)人民解放軍**醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[許可證號(hào) SCXK-(軍)2007-004]。
1.2 主要儀器與試劑
電子天平(BS124S,賽多利斯提供);MLY-Ⅰ型蒙醫(yī)療術(shù)溫針儀(內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院蒙醫(yī)藥學(xué)院研制,**號(hào)ZL201120058078.0);特制蒙醫(yī)銀針(0.5 mm×30 mm,內(nèi)蒙古元陽(yáng)中蒙醫(yī)科技開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司提供);自發(fā)活動(dòng)視頻分析系統(tǒng)(上海欣軟信息科技有限公司提供);****鈉、對(duì)氯苯丙氨酸由 sigma 提供;***注射液(2 mL:10 mg)由西安利君沙制藥有限責(zé)任公司提供(國(guó)藥準(zhǔn)字 H61022214)。
2 方法
2.1 蒙醫(yī)溫針對(duì)****鈉致眠大鼠睡眠時(shí)間的影響
2.1.1 實(shí)驗(yàn)分組及處理方法
取大鼠 30 只,隨機(jī)分為空白對(duì)照組和蒙醫(yī)溫針組,每組 15 只。隨機(jī)分組標(biāo)號(hào)后,在室溫 18℃～28℃、相對(duì)濕度 40%～50%的條件下飼養(yǎng)。蒙醫(yī)溫針組根據(jù)蒙醫(yī)經(jīng)典理論和臨床**有效穴取頂會(huì)穴、赫依穴、心穴,每次取 1 個(gè)穴位。頂會(huì)穴位于兩眉正中線與兩耳葉上緣連線在頭頂上的交叉處;赫依穴位于第 1 胸椎上凹正中;心穴位于第 7 胸椎下凹正中。將大鼠固定后,用特制銀針斜刺,再接蒙醫(yī)療術(shù)溫針儀,電流強(qiáng)度為 100 mA,溫度為 40℃,留針 15 min。每日上午 8:00-11:00 進(jìn)行**,共** 7 d?？瞻讓?duì)照組每日同蒙醫(yī)溫針組相同方法固定 1 次,每次 15 min,連續(xù) 7 d。蒙醫(yī)溫針對(duì)大鼠睡眠時(shí)間和自主活動(dòng)的影響
2.1.2 觀察指標(biāo)
兩組**結(jié)束后給予腹腔注射****鈉(45 mg/kg),觀察兩組大鼠翻正反射消失和恢復(fù)時(shí)間,以翻正反射消失至恢復(fù)的時(shí)間為睡眠持續(xù)時(shí)間,開(kāi)始記錄給藥時(shí)間、翻正反射消失時(shí)間和翻正反射恢復(fù)時(shí)間,睡眠以翻正反射消失為指標(biāo)。分別計(jì)算出睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間。記錄大鼠腹腔注射****鈉后至翻正反射消失時(shí)間為睡眠潛伏期,翻正反射消失至大鼠覺(jué)醒的時(shí)間為睡眠持續(xù)時(shí)間。
2.2 蒙醫(yī)溫針對(duì)**模型大鼠自主活動(dòng)的影響
2.2.1 造模方法
將 PCPA(300 mg/kg)用弱堿性生理鹽水(pH 值為7～8)配置成混懸液備用。**模型組、蒙醫(yī)溫針**組和***注射液組大鼠在實(shí)驗(yàn)前 2 d 每日早晨 8:00開(kāi)始,按1 mL/100 g 用量腹腔注射 PCPA 混懸液,每日1次,連續(xù)注射 2 d。第 1 次腹腔注射PCPA 混懸液 28～30 h 后,大鼠出現(xiàn)晝夜節(jié)律消失,活動(dòng)明顯頻繁,白天也活動(dòng)不停,興奮性增高,攻擊性增強(qiáng),飲食及二便顯著增多,鼠毛蓬亂無(wú)光澤,大便色灰白,整體觀察與對(duì)照組明顯不同,表明**模型成功。
2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及處理方法
取正常雄性 SD 大鼠 60 只,隨機(jī)分為空白對(duì)照組、**模型組、蒙醫(yī)溫針**組和***注射組,每組 15 只,正常飼養(yǎng) 7 d 后予以相應(yīng)處理。①空白對(duì)照組不造模,于實(shí)驗(yàn)前連續(xù) 2 d 腹腔注射同 PCPA 用量體積的弱堿性生理鹽水,第 3 天開(kāi)始實(shí)驗(yàn),與蒙醫(yī)溫針組同樣方法固定 15 min,連續(xù) 7 d,其他處理同蒙醫(yī)溫針組。②**模型組造模 2 d,第 3 天開(kāi)始實(shí)驗(yàn),與蒙醫(yī)溫針組同樣方法固定 15 min,連續(xù) 7 d,其他處理同蒙
醫(yī)溫針組。③蒙醫(yī)溫針組造模 2 d,第 3 天開(kāi)始蒙醫(yī)溫針**,連續(xù) 7 d,針刺方法同實(shí)驗(yàn) 1。④***注射液組實(shí)驗(yàn)前2 d造模,第3天開(kāi)始大鼠腹腔注射***注射液,0.92 mg/kg/d,每日 1 次,連續(xù) 7 d。
2.2.3 曠場(chǎng)試驗(yàn)
參照文獻(xiàn)方法采用曠場(chǎng)試驗(yàn)方法,于**第7天(第 1 次腹腔注射 PCPA 后 7 d),在安靜、暗光條件下檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)前先置大鼠 1 次單獨(dú)放入 OFT-100 自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)儀(箱子長(zhǎng)寬均為 80 cm,高為 40 cm,為內(nèi)空的立柱體,壁周為透明玻璃)中適應(yīng)3 min后,操作者握住大鼠尾根部 1/3 處,輕輕將大鼠放入礦場(chǎng)箱中格內(nèi),開(kāi)始同步錄像計(jì)時(shí)。觀察 5 min 內(nèi)大鼠活動(dòng)情況。取出大鼠后,用毛巾蘸清水及低濃度酒精徹底擦拭箱底,避免留有氣味而干擾下 1 只大鼠的觀察結(jié)果。
2.3 觀察指標(biāo)
①中央格停留時(shí)間(s),即自大鼠被放入正中格至其有 3 爪跨離該格的時(shí)間;②站立次數(shù),即兩前肢向上抬起離開(kāi)箱底面或攀伏在側(cè)壁上,以后腿支撐使身體豎立的次數(shù);③水平活動(dòng)時(shí)間(s),即水平面上活動(dòng)的時(shí)間。蒙醫(yī)溫針對(duì)大鼠睡眠時(shí)間和自主活動(dòng)的影響
2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
所有數(shù)據(jù)采用 SPSS16.0 軟件統(tǒng)計(jì)處理,采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的 t 檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn),計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,以 P＜0.05 表示差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3 結(jié)果
3.1 蒙醫(yī)溫針對(duì)****鈉致眠大鼠睡眠時(shí)間的影響
由表 1 可見(jiàn),蒙醫(yī)溫針組****鈉致眠大鼠睡眠潛伏期與空白對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞·474· Shanghai JAcu-mox, May 2014, Vol 33, No 50.05)。蒙醫(yī)溫針組****鈉致眠大鼠睡眠時(shí)間與空白對(duì)照組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),提示蒙醫(yī)溫針明顯延長(zhǎng)****鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間。
3.2 蒙醫(yī)溫針對(duì)**模型大鼠自主活動(dòng)的影響
空白對(duì)照組大鼠睡眠、飲食等方面無(wú)明顯改變。**模型組、蒙醫(yī)溫針組及***注射液組大鼠于第 1 次腹腔注射 PCPA 混懸液 28～30 h 后,晝夜節(jié)律消失,白天活動(dòng)增多,飲水進(jìn)食減少;隨**時(shí)間的延長(zhǎng),大鼠疲憊、煩躁、皮毛蓬亂無(wú)澤愈加明顯,對(duì)聲音、光等刺激的警覺(jué)性減弱,飲食及二便增多,攻擊性增強(qiáng)。整體觀察與對(duì)照組明顯不同,與文獻(xiàn)報(bào)道一致,表明模型復(fù)制成功。至造模第 8 天,即實(shí)驗(yàn)當(dāng)天**模型組大鼠仍存在上述行為改變。蒙醫(yī)溫針組和***組大鼠在予以針刺刺激和***注射后,表現(xiàn)為安靜、活動(dòng)減少等現(xiàn)象,睡眠時(shí)間、飲水進(jìn)食、精神狀態(tài)等均逐漸恢復(fù)。
3.2.1 4 組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)體重比較
入組時(shí)各組大鼠體重?zé)o明顯差異(P=0.202,F=1.595)。造模前,各組大鼠體重?zé)o明顯差異(P=0.701,F=0.474)。各組大鼠**前體重間有顯著性差異(P=0.000,F=11.156),**模型組、蒙醫(yī)溫針組和***注射液組較空白對(duì)照組減輕(均 P＜0.01)。**后,**模型組大鼠體重與空白對(duì)照組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠體重增加,與空白對(duì)照組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠體重與空白對(duì)照組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
3.2.2 4 組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平活動(dòng)和垂直活動(dòng)參數(shù)比較
由表 3 可見(jiàn),在水平活動(dòng)上,**模型組大鼠活動(dòng)時(shí)間明顯高于空白對(duì)照組大鼠(P＜0.01),**模型組大鼠在中央格停留時(shí)間有增高的趨勢(shì),但與空白對(duì)照組大鼠比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠活動(dòng)時(shí)間明顯低于**模型組大鼠(均 P＜0.05)。在垂直活動(dòng)上,**模型組大鼠站立次數(shù)明顯高于空白對(duì)照組大鼠(P＜0.05),蒙醫(yī)溫針組和***組大鼠站立次數(shù)明顯低于**模型組大
鼠(P＜0.05,P＜0.01)。
4 討論
**癥屬蒙醫(yī)“身、心、語(yǔ)”功能紊亂而引起人體“三根”平衡失調(diào)而導(dǎo)致的“赫依”病。**的關(guān)鍵在于調(diào)節(jié)“三根”平衡,疏通筋脈,促使機(jī)體歸于“三根七素”相對(duì)平衡狀態(tài),恢復(fù)正常生理功能。蒙醫(yī)溫針是集針刺效應(yīng)、溫?zé)嵝?yīng)以及穴位特異性刺激為一體,通過(guò)抑制“赫依”,平衡“三根”的作用達(dá)到****的目的。頂會(huì)穴、赫依穴、心穴是臨床用于****癥的主要穴位。頂會(huì)穴具有**、調(diào)神之功效,對(duì)**“赫依”性喑啞、神志不清、癲狂、視力減退、頭暈、**等起主要作用;赫依穴對(duì)**癲狂、心悸、激蕩、婭結(jié)、夜不能寐、舌苔灰白、頸項(xiàng)強(qiáng)直等赫依性**起主要作用;心穴位對(duì)**心悸、心抖、癲狂、巴達(dá)干赫依性心病、**、譫妄、納呆、神志昏迷等起主要
作用。蒙醫(yī)溫針療法是一種行之有效的****的方法。本實(shí)驗(yàn)中用到的蒙醫(yī)溫針儀是結(jié)合現(xiàn)代電子技術(shù)研制而成,可以達(dá)到傳統(tǒng)蒙醫(yī)溫針的作用,且具有操作簡(jiǎn)便、溫度可調(diào),**等特點(diǎn)。睡眠時(shí)間是評(píng)測(cè)睡眠質(zhì)量的重要指標(biāo)。****鈉為一種**神經(jīng)抑制藥,低劑量時(shí)主要抑制腦干網(wǎng)狀上行激活系統(tǒng),大劑量則對(duì)**神經(jīng)系統(tǒng)起廣泛抑制,從而出現(xiàn)**、催眠、麻醉作用,故在一定閾劑量下可致大鼠睡眠。因此選用****鈉誘導(dǎo)大鼠睡眠是被廣泛采用的**催眠實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)指標(biāo)。在于觀察蒙醫(yī)溫針與****鈉的協(xié)同作用。以往文獻(xiàn)對(duì)****鈉劑量的報(bào)道不一,且大鼠自身對(duì)****鈉的敏感性也存在差異。因此,前期實(shí)驗(yàn)先對(duì)****鈉的閾劑量進(jìn)行了摸索,結(jié)果致大鼠全部睡眠的****鈉閾劑量值為 45 mg/kg。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,蒙醫(yī)溫針與****鈉有協(xié)同作用,可延長(zhǎng)****鈉誘導(dǎo)大鼠睡眠的時(shí)間(P＜0.01),提示蒙醫(yī)溫針具有**催眠的作用。行為是機(jī)體的重要功能表現(xiàn)之一,動(dòng)物的行為是在神經(jīng)、***系統(tǒng)和運(yùn)動(dòng)器官的共同協(xié)調(diào)作用下形成的,其中以神經(jīng)調(diào)節(jié)為主。對(duì)行為學(xué)進(jìn)行評(píng)估時(shí)神經(jīng)、***等研究領(lǐng)域的重要組成部分。目前行為學(xué)評(píng)價(jià)方法有很多種,如觀測(cè)大鼠的一般情況、探究行為、情緒反應(yīng)、體力情況等。本實(shí)驗(yàn)采用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)**大鼠模型的行為學(xué)變化。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在新異環(huán)境中自主行為、探究行為與緊張度的一種方法。本實(shí)驗(yàn)在**模型大鼠造模過(guò)程中,從大鼠一般行為觀察發(fā)現(xiàn),**后的大鼠飲食、能量消耗增加,體重下降。大鼠表現(xiàn)倦怠、體毛蓬亂、無(wú)光澤。在行為上,長(zhǎng)時(shí)間**后的大鼠興奮性提高,探究行為和攻擊性增強(qiáng),對(duì)環(huán)境刺激的警覺(jué)性和攻擊性行為增加。至實(shí)驗(yàn)當(dāng)天時(shí)(**次腹腔注射 PCPA 后 7 d),**模型組大鼠仍存在上述行為異常。蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠在予以針刺刺激和***注射后,睡眠時(shí)間、精神狀態(tài)、飲水進(jìn)食、體重等均逐漸恢復(fù)。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的參數(shù)一般有水平運(yùn)動(dòng)參數(shù)、垂直運(yùn)動(dòng)參數(shù)和中央格停留時(shí)間。水平運(yùn)動(dòng)參數(shù)有跑動(dòng)的距離、速度、時(shí)間等,這些參數(shù)反映動(dòng)物的活動(dòng)度;垂直活動(dòng)指的是動(dòng)物的站立、攀壁、修飾等行為,反映動(dòng)物對(duì)新鮮環(huán)境的好奇程度。在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中大鼠增加在中央格停留時(shí)間,減少外周格時(shí)間,顯示更少的焦慮樣行
為。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,**模型組大鼠在曠場(chǎng)中央格停留時(shí)間高于空白對(duì)照組,顯示出**模型組比空白對(duì)照組減少了焦慮樣行為;**模型組大鼠活動(dòng)時(shí)間和站立次數(shù)明顯高于空白對(duì)照組(P＜0.01,P＜0.05),顯示模型組的探索性行為增強(qiáng)。蒙醫(yī)溫針組大鼠在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中活動(dòng)時(shí)間及站立次數(shù)均明顯低于**模型組(P＜0.01,P＜0.05),曠場(chǎng)中央格停留時(shí)間也比模型組低,表明蒙醫(yī)溫針能夠改善**所致大鼠焦慮樣行為減少和探索行為和探索行為增強(qiáng)的異常變化。通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),蒙醫(yī)溫針改善**的時(shí)間、一般情況和行為學(xué)改變的作用和***注射液的作用無(wú)差別,表明蒙醫(yī)溫針同***注射液一樣,可以改善**大鼠的行為、情緒變化,緩解大鼠的緊張程度,有**催眠的效果。
**導(dǎo)致的煩躁、倦怠等異常行為和情緒變化不僅影響到人的生活質(zhì)量,更會(huì)影響人的認(rèn)知、記憶能力。蒙醫(yī)溫針能延長(zhǎng)**時(shí)間的同時(shí)有效調(diào)節(jié)**模型大鼠精神情緒行為的異常,提示蒙醫(yī)溫針具有改善睡眠、**、**的作用,而其**機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。