鉛是一種神經(jīng)發(fā)育毒物，它對神經(jīng)細(xì)胞的正常發(fā)育以及神經(jīng)遞質(zhì)的正常分泌產(chǎn)生影響和損害[1]，故而，進(jìn)一步影響學(xué)習(xí)和記憶能力。海爾?？诜菏俏以貉兄粕a(chǎn)的保健口服液，已初步證明了其有明顯升高鉛中毒小鼠Hb含量、降低ALT活性等作用[2]。為了進(jìn)一步研究海爾?？诜簩︺U中毒所致小鼠記憶障礙的影響作用并分析其機(jī)制，我們曾用復(fù)雜迷宮趨食法測定小鼠記憶障礙的改善情況，結(jié)果較理想，為進(jìn)一步驗(yàn)證其療效，本文用Y型水迷宮測定小鼠的逃避潛伏期和平均逃避達(dá)標(biāo)率。有報(bào)道鉛中毒者血鉛與血鋅水平呈負(fù)相關(guān)，認(rèn)為糾正缺鋅狀態(tài)是減少腸道對鉛吸收的重要措施[3]，因此，我們嘗試用鋅**鉛中毒小鼠，觀察其改善記憶障礙的作用，并分析鋅與海爾?？诜涸?*鉛染毒所致小鼠記憶障礙中的作用關(guān)系。
1 資料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種健康雄性小鼠60只，鼠齡35天，平均體重20g。由右江民族醫(yī)學(xué)院動(dòng)物室（合格）提供。
1.2試劑 醋酸鉛為國產(chǎn)分析純；海爾福口服液（由銀花、茯苓、甘草等中藥，經(jīng)水提取、乙醇沉淀等流程制成）由本院海爾福研制中心提供；葡萄糖酸鋅口服液由哈藥集團(tuán)三精制藥有限公司生產(chǎn)（批號：05040331）。
1.3 Y型水迷宮測定方法 Y型水迷宮是測定小鼠辨別性記憶的*簡單*常用的方法，該裝置分長臂端和兩分枝短臂端。長臂端長40cm , 寬15 cm，短臂端長30cm, 寬15 cm。長、短臂高均為20 cm。左側(cè)短臂裝有平臺，供小鼠棲身，右側(cè)短臂用木板蓋上，作為暗道，水深10cm，水溫（28±0.5）℃。。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠尾對叉路從長臂端輕輕放入水中，以其在10s內(nèi)直接抵達(dá)平臺為正確反應(yīng)。小鼠抵達(dá)平臺休息15s再重復(fù)訓(xùn)練，每天訓(xùn)練10次，連續(xù)5天，以每組平均正確反應(yīng)率和抵達(dá)平臺所需時(shí)間(逃避潛伏期)作為評價(jià)記憶的指標(biāo)[4]，逃避潛伏期若超過10s則以10記錄。
1.4 動(dòng)物染毒和**方法 60小鼠隨機(jī)分成5組：鋅**組、鋅加海爾福**組、海爾福**組、單純?nèi)俱U組、陰性對照組。除陰性對照組外，其余4組均用2g/L的醋酸鉛水溶液，按每克體重0.007ml劑量作腹腔注射染毒，每天1次，連續(xù)35天；陰性對照組用等體積的生理鹽水腹腔注射。染毒14天后，鋅**組用葡萄糖酸鋅水溶液灌胃，劑量按每只鼠0.02mg，每天1次；海爾福**組用海爾?？诜海瑒┝繛槊渴?.1ml，用蒸餾水稀釋1倍后灌胃，鋅加海爾福**組用葡萄糖酸鋅加海爾?？诜夯旌虾蠊辔?，劑量與鋅**組和海爾福**組相同；單純?nèi)俱U組和陰性對照組用等體積的蒸餾水灌胃，每天1次，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 10.0 統(tǒng)計(jì)軟件包，進(jìn)行方差分析。
2. 結(jié)果
2.1逃避潛伏期比較 單純?nèi)俱U組的逃避潛伏期長，與其他4組比較差異有顯著性（p<0.01和p<0.05）。海爾福**組和鋅**組的逃避潛伏期比鋅加海爾福**組為短，差異有顯著性（p<0.05）。從測試第1天到第5天，各組的逃避潛伏期以第1天*長，然后逐漸縮短，差異有顯著性（p<0.01）。見表1。
表1 各組小鼠用Y型水迷宮所測的逃避潛伏期比較（X±S，S）
第1天 第2天 第3天 第4天 第天 合計(jì) |
鋅**組 4.82±0.72 3.92±0.51 3.25±0.48 3.15±0.80 2.78±0.80 3.66±0.98Δ* 鋅加海爾福**組 5.30 ±1.32 4.28±1.38 3.86±1.08 3.56±1.31 3.24±0.62 4.10±1.32# 海爾福**組 5.，Δ* 合計(jì) 5.45 ±1.29 4.18±0.89▽ 3.43±1.00▽ 3.27±0.94▽3.28±1.02▽ |
注：與單純?nèi)俱U組比較，Δp<0.01，#p<0.05；與鋅加海爾福**組比較，*p<0.05；與第1天比較，▽p<0.01。
2.2 平均逃避達(dá)標(biāo)率比較 鋅加海爾福**組和單純?nèi)俱U組的平均逃避達(dá)標(biāo)率較其他3組低，鋅**組與單純?nèi)俱U組比較，差異有顯著性（p<0.05）。從第1天到第5天，各組平均逃避達(dá)標(biāo)率總體上逐漸提高。見表2。
表 2 各組小鼠用Y型水迷宮所測的平均逃避達(dá)標(biāo)率比較（X±s）
第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 合計(jì) |
鋅**組 83.85±0.07 90.63±0.06 95.01±0.05 98.10±0.04 97.15±0.04 94.20±0.06# 鋅加海爾福**組 77.55±0.15 90.55±0.06 90.25±0.10 96.12±0.05 95.15±0.12 89.05±0.11 海爾福**組 73.23±0.19 88.35±0.08 96.15±0.05 100.00±0.00 97.38±0.05 91.27±0.13 單純?nèi)俱U組 77.35±0.15 88.25±0.13 90.44±0.06 92.23±0.08 96.36±0.05 88.15±0.11 陰性對照組 75.16±0.19 91.28±0.07 96.24±0.08 98.74±0.04 98.80±0.04 92.70±0.15 合計(jì) 79.46± 0.17 90.46±0.06 ▽ 93.33±0.08▽ 97.25±0.05▽ 96.36±0.06▽ |
注：與單純?nèi)俱U組比較，#p<0.05；與第1天比較，▽p<0.01。
3. 討論
本實(shí)驗(yàn)用Y型水迷宮測定小鼠的記憶能力，鋅**組和海爾福**組的逃避潛伏期比單純?nèi)俱U組短，平均逃避達(dá)標(biāo)率提高，說明海爾福口服液和葡萄糖酸鋅均對鉛中毒所致小鼠的記憶障礙有一定改善作用，效果較好。鋅具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)金屬硫蛋白（MT）作用，MT與鉛結(jié)合可使鉛失去毒性[5]；鋅還能拮抗鉛對ALAD的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與此報(bào)道一致。海爾福口服液是由銀花、茯苓、甘草等中藥提煉而成，其中的茯苓等有較強(qiáng)抗氧化作用。而鉛致腦組織脂質(zhì)過氧化是引起神經(jīng)行為改變的生物學(xué)基礎(chǔ)之一[6]，故較強(qiáng)的抗氧化成分可能是海爾?？诜?*鉛中毒所致小鼠的記憶障礙的原因之一，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
各組平均逃避達(dá)標(biāo)率比較，差異不大，僅鋅**組同單純?nèi)俱U組比較，差異有顯著性。原因可能為實(shí)驗(yàn)時(shí)間較短，鉛中毒小鼠的辨別性記憶損害尚不明顯，表現(xiàn)為平均逃避達(dá)標(biāo)率的雖有提高，但各組間差異不顯著。
在實(shí)驗(yàn)結(jié)果中我們發(fā)現(xiàn)，鋅加海爾福**組對鉛中毒所致小鼠的記憶障礙有一定改善作用，但同鋅**組和海爾福**組的**效果比較，逃避潛伏期延長，平均逃避達(dá)標(biāo)率降低，提示海爾?？诜汉推咸烟撬徜\在**鉛中毒所致小鼠的記憶障礙上可能有一定拮抗作用，其機(jī)制不詳，有待進(jìn)一步研究。
